Оксидативный гомеостаз при эндометрите стельных коров

ОКСИДАТИВНЫЙ ГОМЕОСТАЗ У СТЕЛЬНЫХ КОРОВ И ПРИ ОСТРОМ ГНОЙНО-КАТАРАЛЬНОМ ЭНДОМЕТРИТЕ

О.В.РАСПУТИНА
ЗАО"Росветфарм", г.Новосибирск

М.Н.СКОМАРОВА
ИЭВСиДВ

Д.Д. ЦЫРЕНДОРЖИЕВ , В.В.КУРИЛИН
Научный центр клинической и экспериментальной медицины СО РАМН

При срыве физиологической антиок-сидантной системы (АОС) защиты (в условиях низкого поступления экзогенных антиоксидантов, воспаления, стресса, ишемии, гипер- и гипоксии) свободнорадикальное окисление (СРО) лавинообразно разветвляется в тканях. СРО инициируется активными метаболитами кислорода (АМК), основными продуцентами которых являются нейтрофилы, моноциты/макрофаги и другие клетки, т.е. ключевые - эффекторы воспаления. АМК вызывают самые разнообразные изменения на молекулярном уровне (окисление SH-rpynn белков и пептидов, другие окислительно-восстановительные изменения, образование ковалентных сшивок, различные нарушения структуры белков, перекисное окисление липидов и др.), приводящие к повреждениям, выявляемым на уровне мембран, а затем ткани (органа) и целого организма.

В зависимости от места локализации факторы АОС делятся на водо- и жирорастворимые, а по механизму действия -на ферментативные и неферментативные, взаимодействующие с радикалами, элиминируя их из системы; на хелаторы и окислители ионов Fe2+; на вещества, оказывающие мембранотропное действие, так называемые структурные антиоксиданты.

В настоящее время остается практически неизученным окислительный гомеостаз у стельных коров, от состояния которого во многом зависит вынашивание плода. Известно, что при воспалительных заболеваниях, в частности репродуктивной системы, накапливается целый спектр флогогенных и противовоспалительных медиаторов, запускающих и ингибирующих процессы СРО. От баланса про- и антиоксидантной системы зависит характер воспалительного процесса.

Цель нашего исследования - изучить состояние про- и антиоксидантной активности крови коров на разных сроках стельности и при гнойно-катаральном эндометрите до и после их лечения гино-диксином.

Материалы и методы. Исследования проводили на базе ГУСП ОПХ "Элитное" Новосибирской области. Для этого отобрали 51 корову 3 - 5-летнего возраста черно-пестрой породы, из которых 22 были с гнойно-катаральным эндометритом, 21 - на разных сроках стельности и 8 - практически здоровые (контроль).

Гнойно-катаральный эндометрит среди животных диагностировали на основании клинического осмотра и ректального исследования. В комплекс лечения включали гинодиксин в дозе 100 мл (ЗАО "Росветфарм", Новосибирск), который вводили внутриматочно до выздоровления. Гинодиксин - антимикробный химиотерапевтический препарат с утеротоническим эффектом, представляющий собой стерильный, прозрачный раствор желтозеленого цвета со специфическим запахом. В состав препарата входят: 1,4-Ди-М-окись 2,3-бис (оксиметил) хиноксалин (диоксидин) и синтетический аналог фитогормона.

Про- (ПОА) и антиоксидантную (АОА) активность сыворотки крови оценивали до и через 5 сут после курса лечения животных гинодиксином. При этом использовали биохемилюминометр "СКИФ-0306М" (НПО "Наука", Красноярск). Кровь для исследования брали из яремной вены .

ПОА сыворотки крови определяли по методу Д.Н. Маянского и соавт. [3]. В качестве интегральной оценки ПОА брали метод лейкоцитмодулирующей активности. В кюветы (для хемилюминесцентного анализа), содержащие 5x105 нейтрофилов здоровых животных, 0,7 мл бесцветного раствора Хенкса и 0,1 мл0,1мМ раствора люминола, добавляли тестируемые образцы сыворотки крови коров. Результат оценивали в отн. ед. по индексу  СТИМУЛЯЦИИ:   ISUM опыт/^иМконтроль-   гДв

'SUM ОПЫТ ~ суммарный хемилюминесцентный ответ (ХЛ ответ) лейкоцитов при добавлении сыворотки тестируемых животных; !3имконтРоль - суммарный ХЛ ответ лейкоцитов при добавлении бесцветного раствора Хенкса.

Для определения АОА (хемилюминес-центный метод) использовали методику Г.И.Клебанова и соавт. [2], основанную на степени торможения ХЛ тестируемыми образцами сыворотки крови в системе НЬ+Н2О2+люминол. Для более детального изучения взаимодействия про- и антиоксидантной систем рассчитывали коэффициент их соотношения (Кс) по следующей формуле: Кс = ПОА / АОА.

Гинодиксин тестировали in vitro для установления дозозависимого эффекта. При оценке ПОА и АОА в кюветы для хемилюминесцентного анализа (вместо сыворотки крови) добавляли гинодиксин в концентрациях: 100; 75; 50; 25 и 10%.

Полученные данные обрабатывали статистически с помощью лицензированных пакетов прикладных программ "Statistica 5.0" и "Microsoft Exel 7.0" на PC Pentium-IV. Оценивали значимость различий двух средних арифметических значений по t-критерию Стъюдента и его достоверность.

Результаты исследований и обсуждение. Данные по ПОА сыворотки крови коров на разных сроках стельности представлены в табл. 1. В контрольной группе животных показатель варьировал от 210,3 до 345,7 отн. ед. и в среднем составлял 278,3±14,2 отн. ед., в опытных он неуклонно   снижался.   Так,   при   сроке стельности 8-30 дней ПОА сыворотки крови уменьшалась в 2,76 раза, а через 2 - 3,5 и 5 - 7,5 мес - соответственно в 3,56 и 3,6 раза   ( <0,001).

Одномоментно со снижением ПОА падала АОА сыворотки крови. Так, если в среднем АОА сыворотки контрольных животных составляла 33,4±2,15 отн. ед., то у стельных на 8 - 30-м дне беременности данный показатель уменьшился в 19,1 раза, а через 2 - 3,5 и 5 - 7,5 мес - соответственно в 29,3 и 15,9 раза (Р<0,001).

Среднее значение коэффициента соотношения (Кс) ПОА/АОА в сыворотке крови коров контрольной группы равнялось 8,3±1,12 отн.ед., при этом у животных опытных групп на 8 - 30-е сутки стельности Кс вырос в 6,7 раза, а через 2 - 3,5 и 5 - 7,5 мес - соответственно в 9,3 и 6,4 раза (Р<0,001).

Совершенно иную картину фиксировали при исследовании состояния ПОА и АОА сыворотки крови коров с гнойнокатаральным эндометритом (табл. 2). ПОА сыворотки крови у них была в 5,4 раза выше, чем в контроле (Р<0,001). В то же время АОА сыворотки крови достоверно снижалась в 2,18 раза, а показатель Кс был значительно выше (в 20,8 раза), чем в контроле (Р<0,001).

В результате лечения коров с гнойнокатаральным эндометритом гинодиксином ПОА сыворотки крови снижалась. Однако среднее значение    показателя

Таблица 1

Показатели оксидативного гомеостаза у коров в различные сроки стельности, отн.ед.

 

Срок

 

 

 

стельности

ПОА

АОА

кс

8-30 дней

 

 

 

(п=8)

00,48+21,91*

1,75±0,38*

55,76+5,8*

2-3,5 мес

 

 

 

(п=8)

78,08+12,31*

1,14+0,22*

76,74±7,65*

5-7,5 мес

 

 

 

(п=5)

76,94±14,43*

2,1+0,85*

52,88+10,3*

Контроль

 

 

 

(п=8)

278,3+14,2

33,4+2,15

8,3±1,12

* Р<0,001 по сравнению с контролем.

 

было статистически недостоверным по сравнению как с исходными данными, так и с контролем, поскольку у 2 коров ее параметры оставались высокими. В то же время по сравнению с исходными данными среднее значение АОА сыворотки крови коров после применения им гино-диксина достоверно снижалось и не отличалось от контроля.

После лечения коров с гнойно-катаральным эндометритом гинодиксином среднее значение Кс ПОА/АОА сыворотки крови достоверно уменьшалось в 20,76 раза. Однако данный параметр в этом случае оставался достоверно высоким по сравнению с контролем .

Результаты исследования in vitro показали, что в тест-системе НЬ+Н2О2+люминол максимальное количество хемилюминесцентных (ХЛ) импульсов составляет 9,5x105. При добавлении 10%-ной концентрации гинодиксина число ХЛ импульсов снижалось вдвое, а при 100%-ной - до 0,35x105, что свидетельствует о том, что данный препарат обладает прямым антиоксидантным действием .

Таким образом, у коров на разных сроках стельности и при гнойно-катаральном эндометрите характер изменения ПОА сыворотки крови разнонаправленный. В то же время в обоих случаях отмечали выраженное снижение АОА сыворотки и повышение показателя Кс. Дисбаланс в системе "оксиданты - антиоксиданты", судя по параметру Кс, в сторону усиления окислительных   процессов   в   научной литературе обозначают как феномен "окислительного стресса". По Кс у животных на разных сроках стельности однозначно утверждать о развитии окислительного стресса, вероятно, нельзя, поскольку абсолютные значения ПОА в сыворотке крови значительно ниже контроля. При этом снижение антиоксидантного потенциала, может быть связано с активным потреблением антиоксидантов, которые подавляют СРО, что в конечном итоге приводит к уменьшению ПОА. Данный факт, возможно, связан с изменениями гормонального статуса при беременности.

При гнойно-воспалительном процессе в эндометрии коров показатели соотношения ПОА/АОА свидетельствуют о преобладании прооксидантных факторов в крови. Следовательно, в эндометрии развивается выраженный окислительный стресс, что может привести к развитию структурных повреждений в результате непосредственного или опосредованного действия свободных радикалов или вторичных продуктов индуцируемых ими процессов, например свободнорадикального ПОЛ.

Лечение коров гинодиксином способствовало быстрому устранению симптомов воспаления. Клиническая картина заболевания изменялась уже на следующий день после введения препарата и характеризовалась первоначально резким увеличением количества выделяемых лохий, а затем их уменьшением и прекращением к 3 - 4-му дню заболева-ния. Одновременно с этим в цитограмме маточно-влагалищных выделений на 2-й день после терапии уменьшалось количество деструктированных нейтрофилов и очаговых скоплений микрофлоры, увеличивалось число эпителиальных клеток. На 5-й день отмечали единичные скопления микробов, появление симпластов ороговевающих и неороговевающих (суперфициальных) эпителиальных клеток и лейкоцитов.

При этом у больных коров при использовании гинодиксина ПОА сыворотки крови снижается, а АОА -  повышается и соответственно изменяется их соотношение.

Известно, что ключевым патогенети-ческим звеном воспалительного процес-са любой локализации является повы-шенная миграция лейкоцитов в очаг воспаления, обусловленная высоким содержанием микробных антигенов и других хемотактических факторов. Фаго-цитирующие клетки (Нф и макрофаги) санируют очаг воспаления, продуцируя активные метаболиты кислорода (АМК) и лизосомальные ферменты, способствуя росту прооксидантного потенциала в зоне поражения.

Механизм действия гинодиксина достаточно сложен и находится в прямой зависимости от входящих в него компо-нентов. Бактерицидный и противовоспа-лительный эффект препарата обусловлен входящим в его состав диоксидином. В основе механизма его бактерицидного действия лежит повреждение биосинтеза ДНК микробной клетки с глубокими нарушениями структуры нуклеоида. Этот процесс протекает активнее в анаэробных условиях и сопровождается активацией свободнорадикальных процессов и образованием активных форм кислорода. Одновременно с прооксидантным эффектом в отношении бактериальной клетки диоксидин обладает ранозаживляющим действием и обеспечивает "морфологическое" выздоровление тканей. Другой компонент препарата -синтетический аналог фитогормона оказывает ингибирующее влияние на процессы перекисного окисления липидов.

При исследовании in vitro установили прямое антиоксидантное действие гинодиксина. Это, очевидно, связано с тем, что в комплексном препарате в силу каких-то условий доминирует антиоксидантный эффект, проявляющийся в условиях синергизма входящих в его состав компонентов.

Таким образом, у коров на разных сроках стельности наблюдается снижение как ПОА, так и АОА сыворотки крови, что может свидетельствовать об усилении потребления антиоксидантов и защиту плода от действия деструктивных прооксидантных факторов. Достоверное повышение ПОА, снижение АОА в сыворотке крови и рост коэффициента соотношения ПОА/АОА (Кс) указывают на развитие окислительного стресса при гнойно-катаральном эндометрите животных.

Лечение коров с гнойно-катаральным эндометритом гинодиксином приводит к снижению ПОА сыворотки крови за счет установленного прямого антиоксидантного действия данного препарата.

 

 

 

 

Реклама на сайте