МИКРОБНЫЕ АССОЦИАЦИИ ПРИ ГНОЙНО-НЕКРОТИЧЕСКИХ
ПОРАЖЕНИЯХ КОПЫТ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
А.П. Лемиш
заведующий лабораторией молекулярной биологии, кандидат ветеринарных наук;
РУП «Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н. Вышелесского»,
А.С. Андрусевич
Старший научный сотрудник, кандидат ветеринарных наук;
РУП «Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н. Вышелесского», г. Минск, Республика Беларусь;
М.Н. Корнеева,
младший научный сотрудник;
РУП «Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н. Вышелесского», г. Минск, Республика Беларусь;
Н.А. Гелейша
технолог,
РУП «Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н. Вышелесского», г. Минск, Республика Беларусь;
А.Э. Станкуть
ветеринарный врач,
РУП «Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н. Вышелесского», г. Минск, Республика Беларусь.
РЕЗЮМЕ
В статье приводятся данные об исследованиях объектов внешней среды, из которых были выделены микроорганизмы, являющиеся осложняющей микрофлорой при копытной гнили. Входе исследований мест поражений копытного рога были выделены аэробные и анаэробные сапрофитные и условно патогенные микроорганизмы родов Bacillus, Aeromonas, Staphylococcus, Streptococcus, Enterococcus, Proteus, E. coll, Salmonella, Leuconostoc, Bacteroldes, Clostrldlum, Fusobacterlum nucleatum, Fusobacterlumnecroforum. Проведен анализ данных Главного управления ветеринарии по некробактериозуза пять лет.
ВВЕДЕНИЕ
Копытная гниль крупного рогатого скота в настоящее время обнаруживается во многих странах мира с развитым животноводством. Современные требования к количеству и качеству получаемой животноводческой продукции обуславливают применение интенсивныхтехнологий заготовки кормов, кормления животных, их выращивания и доения. В таких условиях необходимо четкое выполнение технологических приемов, несоблюдение которых может приводить к необратимым последствиям, связанным с недополучением прибыли, экономическим потерям. Существует много теорий раскрывающих причины возникновения копытной гнили. Некоторые исследователи считают, что причиной возникновения и распространения данного заболевания являются инфицированные животные. Другие считают, что причиной развития инфекционного процесса является нарушение технологии кормления и содержания животных, приводящее к развитию патологического процесса, патологическим состояниям .
Табл. 1. Культуры, выделенные из объектов внешней среды МТК «Зайцева слобода»
Табл. 2. Общий анализ по стаду по состоянию на июнь-июль 2011 г.
В патогенезе гнойно-некротических инфекций участвуют три важнейших фактора: возбудитель, собственная микрофлора организма больного животного и его реактивность (состояние иммунной системы). По словам И.В. Давыдовского - советского патологоанатома, гнойная инфекция является «эндогенной инфекцией сенсибилизированного организма». Для реализации воспалительного процесса необходимо, чтобы анти-генное раздражение превысило защитные возмож-ности иммунной системы. Это происходит при чрез-мерном размножении возбудителя или их ассоциаций в одном из естественных резервуаров существования микрофлоры в организме животного (желудочно-кишечный тракт, дыхательные пути, кожные покровы) и занесении гематогенным путем в пораженный орган (печень, дистальные части конечностей) .
Гнойно-воспалительные заболевания достаточно редко приводят к летальному исходу, по некоторым данным, всего до 5% от заболевших животных. Но непроизводственное выбытие животных на мясокомбинат по причине заболеваний копыт может достигать в современных молочно-товарных комплексах до 70-75%. Потери молочной продуктивности одной головы дойного стада могут достигать до 600 кг молока за лактацию.
Через год в хозяйстве, ранее благополучном по болезням копыт, хромота может достигать более 40% животных дойного стада. На практике, через 2-3 недели после постановки новых животных в хозяйствах страдают 18-38% завезенных нетелей и коров.
Целью исследований явилось определение этиологических факторов возникновения некробактериоза в хозяйствах республики с интенсивными технологиями ведения животноводства и выделение штаммов микроорганизмов участвующих в поражении копыт.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Исследования проведены на животных, принадлежащих двум хозяйствам Республики Беларусь.
В хозяйствах у коров с явными поражениями копыт провели ортопедическую обработку конечностей. Из мест поражений в стерильные пробирки с транспортной средой отобрали фрагменты пораженного рога с примесью гноя и крови для бактериологического исследования. Были взяты пробы кусочков некротических поражений, на границе омертвевшей и здоровой ткани, которые затем в условиях лаборатории растирали в стерильных ступках, суспендировали в физиологическом растворе и дробно засевали на поверхность сердечно-мозгового агара с добавлением 10% сыворотки, Китт-Тароцции, Эндо, Сабуро. Культуры выращивали в аэробных, анаэробных условиях 3 суток при температуре 37,5°С. На среде Сабуро 5-7 суток при температуре 20-22°С. Идентификацию изо-лятов микроорганизмов провели с использованием прибора VITEK 2.
Для бактериологического исследования объектов внешней среды были отобраны пробы сенажа (3), земли с выгонов, подстилки, пробы навоза со стоков (4).
Провели постановку полимеразной цепной реакции (ПЦР) диагностической тест-системой для обнаружения F. necroforum, с детекцией в электрофоретическом геле.
Биохимическоий анализ сыворотки крови коров провели на приборе DIALAB Autolyser.
До начала опыта, в процессе и после его завершения учитывали количество коров с поражениями копыт и нуждавшиеся в обработке, а также оценивали степень поражения конечностей.
РЕЗУЛЬТАТ ИССЛЕДОВАНИЙ
В ходе наших исследований было установлено, что в патологическом процессе на коже вокруг копыта участвует группа из нескольких разных бактерий (рис. 1-4).
При исследовании объектов внешней среды (табл. 1) были выделены микроорганизмы родов Bacillus, Aeromonas, Staphylococcus, Bacteroides, Clostridium, являющиеся осложняющей микрофлорой при копытной гнили.
Анализ состояния копыт у коров на МТФ СПК «Первое». Содержится 642 головы дойного стада. Помещение № 1 - 316 коров, помещение №2 - 326 коров. Содержание беспривязное, животные разделены на секции (Табл.2).
Патология копыт отмечалась у 110 коров первого коровника (34,8%) и у 143 коров второго коровника (43,8%). За время исследований число коров, нуждавшихся влечении копыт в первом коровнике, составило- 178 голов или 56,3%,а во втором коровнике- 127 или 38,9%. Для обработки копыт в хозяйстве используют ванны с 10% раствора медного купороса.
Анализ состояния копыту коров на МТК «Зайцева слобода» и СПК «Второе». Содержание беспривязное, животные разделены на секции. Общий анализ состояния конечностей коров, принадлежащих этим двум хозяйствам, представлен в табл. 2.
Процент выбытия коров по болезням конечностей составляет 50-60% от общего числа выбывших животных.
При анализе данных Главного управления ветеринарии по некробактериозу за пять лет (2006-2011 гг.) было установлено 27 неблагополучных пунктов по данному заболеванию. Количество заболевших - 1714 голов. Результаты анализа представлены в таблице 3 и 4.
В РУП «Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н Вышелесского» были проведены исследования патологического материала взятых от коров с различными проявлениями гнойно-некротического поражения дистальных частей задних конечностей, принадлежащих хозяйствам Республики Беларусь. Результаты исследований представлены в табл. 5.
Из приведенных данных видно, что в гнойно-некротическом очаге воспаления присутствует разнообразная облигатно-факультативная анаэробная и аэробная микрофлора: Fusobacterium, Clostridium,
Рис. 1-2 Гнойно-некротические поражения копыт и кожи вокруг копыт
Табл. 3. Данные Главного управления ветеринарии по некробактериозу за пять лет (2006-2011 гг.)
Табл. 4. Данные Главного управления ветеринарии по выбытию животных за счет травм (2006-2011 гг.)
Рис. 3-4. Гнойно-некротические поражения копыт и кожи вокруг копыт
Табл. 5. Результаты бактериологического исследования пораженных копыт дойных коров с идентификацией в ПЦР
Veillonella, Bacteroides, Enterococcus, Staphylococcus, Streptococcus, Proteus, Leuconostoc, E. coli в некоторых случаях Salmonella, Bacillus. Столь сложная микробная ассоциация объясняется тем, что каждая из бактерий в процессе своей жизнедеятельности создает условия для жизни других бактерий, создавая очаг воспаления и защищаясь, таким образом, от излишнего влияния кислорода и иммунной системы организма.
При постановке ПЦР диагностической тест-системой для обнаружения F. necroforum, с детекцией в электрофоретическом геле, производства РУП «Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н. Вышелесского» положительными оказались пробы под номерами: 3, 5, 8, 9, 10, 11, 12. Результат представлен на рис. 5.
При определении устойчивости к антибактериаль-ным препаратам установлена бактерицидная и бак-териостатическая активность. Результат представлен в таблице б.
Из полученных результатов видно, что практически все антибактериальные препараты действуют на вы-деленные культуры бактериостатически, лишь только некоторые из антибиотиков действуют бактерицидно и только в монокультуре. Таким образом, лечение не-обходимо осуществлять с применением одновременно двух, трех антибактериальных препаратов.
Рис. 3 Специфическое свечение в электрофоретическом геле говорит о наличии в образце ДНК Fusobacterium necrophorum
При биохимическом анализе сыворотки крови ис-следуемых коров были получены результаты, указы-вающие на некротические процессы в печени живот-ных. Во всех исследованных пробах было обнаружено резкое понижение уровня основных печеночных фер-ментов ALAT (аланинаминотрансфераза) и ASAT (аспартатаминотрансфераза). Среднее значение у всех исследуемых животных составило ALAT 2,47 Ед/л, при норме 17-37 Ед/л, ASAT 1,96 Ед/л, при норме 30,3-110,2 Ед/л. Это указывает на значительное уменьшение количества клеток, синтезирующих данные ферменты, под действием различных токсинов, в том числе и бактериальных, а также на недостаток в рационе витаминов группы (Вб, В12, РР, А, Е).
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
1. При исследовании объектов внешней среды были выделены микроорганизмы родов Bacillum, Aeromonas, Staphylococcus, Streptococcus, Bacteroides, Clostridium, являющиеся осложняющей микрофлорой при копытной гнили.
2. При исследовании мест поражений копытного рога были выделены аэробные и анаэробные сапрофитные и условно патогенные микроорганизмы родов Bacillum, Staphylococcus, Streptococcus, Enterococcus, Proteus, E. coli, Salmonella, Leuconostoc, Bacteroides, Clostridium, Fusobacterium nucleatum, necroforum.
Табл.б.Учетантибиотикочувствительности выделенных культур
3. Процент заболеваемости коров по болезням конечностей составляет 50-60% от общего числа выбывших животных.
При анализе данных Главного управления ветеринарии по некробактериозу за пять лет (2006-2011 гг.) было установлено 27 неблагополучных пунктов по данному заболеванию. Количество заболевших 1714 голов.
журнал "ВЕТЕРИНАРИЯ СЕГОДНЯ" ДЕКАБРЬ №3 {3}
№ кошелька: 410011987169836