Повышение иммуногенной активности вакцин

ПОВЫШЕНИЕ ИММУНОГЕННОЙ АКТИВНОСТИ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ОСТРЫХ КИШЕЧНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ У ТЕЛЯТ

Г.Н. КУЗЬМИН, A.M. СКОГОРЕВА, O.B. ПОПОВА, К.В. ПРИБЫТКОВА
ФГОУ ВПО «Воронежский государственный аграрный университет имени К. Д. Глинки»

В общей патологии молодняка крупного рогатого скота большой удельный вес занимают острые кишечные заболевания. Отход телят в первые месяцы жизни в зависимости от уровня ведения животноводства достигает в среднем 10-50% и более (Девришов ДА, 2000). Для предупреждения острых кишечных заболеваний крупного рогатого скота в нашей стране используют живые и инактивированные вакцины, но вакцинация не обеспечивает необходимого уровня иммунитета (Апатенко A.M. и соавт., 1990; Артемов Б.Т. и соавт., 1998), что может быть связано с общей иммунной недостаточностью у животных в условиях воздействия на организм различных неблагоприятных факторов (Жаков М.С. и соавт., 1993; Прудников СИ., 1996; Артемов Б.Т., 1998).

Решить проблему недостаточной эффективности проводимой вакцинации можно путем использования иммуномодулирующих препаратов, способных повышать естественную резистентность животных, напряженность и длительность поствакцинального иммунитета (Басова Н.Ю., 2002; Яковлев Ю.Ю., 2004). В этом отношении перспективными являются катионные поверхностно-активные вещества, в частности широко используемый в различных областях медицины препарат мирамистин, сочетающий выраженные антибактериальные, вирулицидные и иммуномодулирующие свойства (Кривошеий Ю.С., 1985; Шатров В.А., 1992).

Цель нашей работы - повышение эффективности иммунизации против инфекционных кишечных болезней телят путем использования в качестве иммуномодулятора мирамистина. Исследования проводились на кафедре эпизоотологии и вирусологии ФГОУ ВПО «Воронежский ГАУ им. К.Д. Глинки», опытной станции ВГАУ, ЗАО «Родина» Россошанского района и ООО «Ольшанка» Семилукского района Воронежской области.

Для изучения мы взяли широко распространенную вакцину ОКЗ (против острых кишечных заболеваний), которая представляет собой ассоциированную инактивированную вакцину против колибактериоза, сальмонеллеза, клебсиеллеза и протейной инфекции молодняка сельскохозяйственных животных и пушных зверей. Эта вакцина не обеспечивает достаточно напряженного иммунитета. Согласно наставлению рекомендуется с целью стимуляции антителообразования непосредственно перед иммунизацией в вакцину добавлять иммуномодулятор Т-активин. На практике выполнить данную рекомендацию представляется затруднительным, так как во флаконе с вакциной недостаточно объема для добавления иммуномодулятора, а дозировать его на каждое животное излишне трудоемко. Кроме того, высокая стоимость Т-активина является препятствием для его широкого использования в промышленном животноводстве. Поэтому мы начали экспериментальное изучение возможности включения мирамистина в композицию вакцины ОКЗ.

Иммуноадъювантный механизм действия мирамистина основан на повышении проницаемости цитоплазматических мембран лимфоидных клеток и усилении их метаболизма, а также интенсификации функциональной активности фагоцитов, в результате чего последние более эффективно осуществляют фагоцитоз и презентацию антигена иммунокомпетентным клеткам (Шатров В.А., 1992; Криворутченко Ю.С. и соавт., 2000; Завалий М.А. и соавт., 2000). С другой стороны, мирамистин, являясь по своей химической структуре детергентом, оказывает солюбилизирующий эффект на клеточные мембраны бактериальных структур в составе вакцины, тем самым делая антигенные комплексы более доступными для антигенпредставляющих клеток организма, что положительно сказывается на скорости и силе иммунного ответа.

В лабораторных условиях было изучено влияние мирамистина на эффективность вакцинации у белых мышей. В опыте использовали 100 белых беспородных мышей, разделенных на четыре группы (п=25). Животных первой группы иммунизировали внутрибрюшинно вакциной ОКЗ в дозе 0,5 мл (Девришов ДА, 2000) в смеси с 1,0 мл физиологического раствора. Мышам второй группы внутрибрюшинно ввели вакцину ОКЗ в той же дозе, смешанную с 1,0 мл 0,01%-ного раствора Т-активина, третьей - с 1,0 мл 0,01%-ного мирамистина. Согласно исследованиям Шатрова В.А. (1992), максимально выраженная стимуляция гуморального иммунного ответа наблюдается при введении мирамистина в дозе 100 мкг на мышь, что соответствует 1,0 мл 0,01%-ного раствора мирамистина. Животным четвертой группы (контрольной) инъецировали 1,5 мл физиологического раствора.

Через 15 и 30 дней после иммунизации в сыворотке крови мышей определяли титр противосальмонеллезных и противоэшерихиозных антител в реакции агглютинации по общепринятой методике. Было установлено, что у мышей, которым вводили вакцину ОКЗ в сочетании с мирамистином, титр антител к сальмонеллезному антигену на 15-й день после вакцинации был в 1,7 раза, а на 30-й день в 1,6 раза выше, чем у животных, иммунизированных одной вакциной. Титр противоэшерихиозных антител также был выше у мышей, привитых вакциной ОКЗ с мирамистином - в 1,6 раза на 15-й день и в 1,4 раза на 30-й день по сравнению с животными, которым вводилась одна вакцина. Таким образом, введение мирамистина при вакцинации животных инактивированной вакциной оказывает стимулирующее воздействие на формирование защитных антител.

Подбор оптимальной дозы мирамистина при вакцинации телят осуществлялся введением 0,8; 2 и 3 мл/ гол. (в наставлении к вакцине ОКЗ рекомендуется добавлять в вакцину Т-активин из расчета 0,02 см3/кг массы животного, то есть 0,8 мл/гол.). Полученные данные представлены в табл. 1.

Из табл. 1 видно, что уровень специфических антител у телят, привитых с мирамистином и Т-активином в дозе 0,8 мл/гол., достоверно высокий и существенно не различается. Более высокие дозы мирамистина (2 и 3 мл/гол.) способствуют достоверному увеличению титров специфических противосальмонеллезных антител к 15-му дню по сравнению с Т-активином на 31,0 и 36,2%, а к 30-му дню - на 27,9 и 34,4% соответственно, что является доказательством выраженных иммуноадъювантных свойств препарата. Такая же картина наблюдается и в отношении противоэшерихиозных агглютининов - титры достоверно выше к 15-му дню на 71,9 и 84,4%, а к 30-му дню - на 46,2 и 61,5% соответственно для доз 2 и 3 мл/гол.

Помимо этого, для оценки гуморального иммунитета определили содержание иммуноглобулинов классов G, М и А в крови телят опытных и контрольной групп (табл. 2).

Уровень IgG достиг максимального значения во всех опытных группах к 15-му дню после вакцинации.

Динамика специфических титров антител в сыворотке крови телят при вакцинации с иммуномодуляторами

Таблица 1

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

№ п/п

Группа (п=25)

Антигены

Уровень специфических антител (log2)

фон

через 15 дней

через 30 дней

1.

Вакцина ОКЗ 1,5 мл

Сальмонелл езный

2,0±0,4

3,7± 0,5***—

3,9± 0,7***—

Эшерихиозный

1,4±0,2

2,9± 0,8***—

3,1± 0,8***'"

2.

Вакцина ОКЗ 1,5 мл + Т-активин 0,8 мл

Сальмонелл езный

1,9±0,4

5,8± 1,2***—

6,1± 0,9***—

Эшерихиозный

1,5±0,4

3,2± 1,1***—

3,б± 1,2***—

3.

Вакцина ОКЗ 1,5 мл + мирамистин 0,8 мл

Сальмонелл езный

1,9±0,24

5,9± 1,1***—

6,3± 1,5***—

Эшерихиозный

1,4±0,22

3,6± 1,6***—

3,9± 1,5***—

4.

Вакцина ОКЗ 2,0 мл + мирамистин 2,0 мл

Сальмонелл езный

2,1 ±0,3

7,6± 2,3***—

7,8± 1,3***—

Эшерихиозный

1,5±0,15

5,5± 1,9***—

5,7± 1,9***—

5.

Вакцина ОКЗ 1,5 мл + мирамистин 3,0 мл

Сальмонеллезный

1,9±0,2

7,9± 2,5***—

8,2± 2,0***—

Эшерихиозный

1,4±0,15

5,9± 2,1***—

6,3± 1,8***—

6.

Интактная

Сальмонеллезный

2,0±0,2

1,9±0,4

2,0±0,4

Эшерихиозный

1,4±0,30

1,4±0,1

1,6±0,25

   Примечание: достоверность различий *, **, *** - к фону; *, **, *** - к интактной группе Р<0,05; 0,01; 0,001 со-ответственно.

Таблица 2 Динамика иммуноглобулинов в сыворотке крови телят при вакцинации с иммуномодуляторами

 

 

№ п/п

Группа (п=5)

Ig G, мг/л

Ig А, мг/л

Ig M, мг/л

фон

через 15 дней

через 30 дней

фон

через 15 дней

через 30 дней

фон

через 15 дней

через 30 дней

1.

Вакцина ОКЗ 1,5 мл

10,49± 0,05

11,66± 0,10

11,60± 0,09

1,80± 0,02

2,02± 0,02

1,97± 0,06

1,47± 0,04

1,58± 0,08

1,55± 0,07

2.

Вакцина ОКЗ 1,5 мл + Т-активин 0,8 мл

10,51± 0,04

13,88± 0,12**

13,27± 0,11**

1,78± 0,06

2,15± 0,10*'

2,11± 0,08*'

1,46± 0,11

1,67± 0,06

1,62± 0,10

3.

Вакцина ОКЗ 1,5 мл + мирамистин 0,8 мл

10,51± 0,06

13,91± 0,10**

13,52± 0,15**

1,77± 0,08

2,17± 0,09**

2,23± 0,05*'

1,45± 0,07

1,72± 0,03*'

1,68± 0,09

4.

Вакцина ОКЗ 1,5 мл + мирамистин 2,0 мл

10,47± 0,04

14,88± 0,14*'

14,08± 0,11*-

1,79± 0,05

2,25± 0,08*'

2,37± 0,07*'

1,44± 0,05

1,89± 0,09*'

1,81± 0,10*

5.

Вакцина ОКЗ 1,5 мл + мирамистин 3,0 мл

10,47± 0,07

15,57± 0,13***

14,40± 0,09*'

1,79± 0,05

2,30± 0,12*'

2,39± 0,08*'

1,45± 0,06

2,10± 0,11*"

1,92± 0,05*'

6.

Интактная

10,50± 0,03

11,11± 0,02

11,52± 0,04

1,78± 0,04

1,82± 0,10

1,90± 0,01

1,45± 0,06

1,44± 0,03

1,51± 0,07

Примечание:  достоверность различий *, **, *** - к фону; *, **, *** - к интактной группе Р<0,05; 0,01; 0,001 соответственно.

Наиболее высокое его содержание наблюдается в группах, где вакцина вводилась в сочетании с мирамистином. При этом наивысшие результаты достигнуты при введении препарата в дозах 2 и 3 мл/гол. К 30-му дню содержание IgG несколько снизилось по сравнению со значениями показателя на 15-й день, оставаясь при этом достоверно высоким по сравнению с фоном. Уровень IgA в первой и второй группах максимально высокий на 15-й день после иммунизации, к 30-му дню он незначительно снижается. В третьей, четвертой и пятой группах содержание IgA продолжает достоверно расти и после 15-го дня. Таким образом, на 30-й день значение IgA в первой группе практически не отличается от контроля, в остальных группах оно было достоверно выше. Тенденция к росту показателя наиболее выражена в группах, где животных вакцинировали с мирамистином, при этом различия в двух последних группах были незначительны.

Уровень IgM наиболее высокий на 15-й день, после чего он также незначительно снижается во всех опытных группах. На 30-й день содержание IgM достоверно высокое по отношению к фоновым значениям в четвертой и пятой группах.

Таким образом, анализируя динамику иммуноглобулинов основных классов (А, М и G), можно констатировать их достоверное повышение после вакцинации с иммуномодуляторами (за исключением IgM после вакцинации с Т-активином и мирамистином в дозе 0,8 мл/ гол.). Использование мирамистина в дозах 2 и 3 мл/гол, показало наилучшие результаты, поскольку позволило поддерживать факторы гуморального иммунитета на высоком уровне в течение всего опыта, причем показатели в этих двух группах различались несущественно.

Для оценки клеточного звена иммунитета в периферической крови животных опытных и контрольной групп определили количество иммунокомпетентных клеток в абсолютном содержании, а также соотношение Т- и В-лимфоцитов. В результате исследований установили высокую активность иммунокомпетентных клеток при иммунизации с иммуномодуляторами (табл. 3).

У телят, вакцинированных с иммуномодуляторами, было отмечено достоверное повышение количества лимфоцитов по сравнению с контрольными и фоновыми значениями. Наибольшие значения были достигнуты в четвертой и пятой группах на 15-й и 30-й день после иммунизации. Количество лимфоцитов в группе, где применялась только вакцина, также выросло, но разница была недостоверной по отношению к показателям интактной группы. Количество Т-лимфоцитов было максимально высоким на 15-й день после вакцинации (достоверно для всех опытных групп), затем оно несколько снизилось к 30-му дню. В группах, где телят вакцинировали с Т-активином и мирамистином в дозах 0,8 мл/гол., значения различались незначительно. В четвертой и пятой группах, где доза мирамистина составляла 2 и 3 мл/гол., содержание Т-клеток на 15-й день опыта достигло 62,00 и 69,40%, на 30-й - 54,40 и 59,00% соответственно.

В отношении В-лимфоцитов прослеживалась подобная тенденция. Их содержание на 15-й день после иммунизации достоверно выросло во всех группах, за исключением первой. На 30-й день количество В-клеток снизилось во всех опытных группах, оставаясь достоверно высоким по отношению к интактной группе во второй, четвертой и пятой группах.

Таким образом, установлено, что наиболее высокая активность лимфоцитов наблюдалась при иммунизации телят с мирамистином в дозах 2 и 3 мл/гол., при этом результаты, полученные при введении двух этих доз, различаются незначительно, что позволяет рекомендовать дозу 2 мл/гол.

Из полученных данных следует, что иммунизация телят вакциной ОКЗ в сочетании с мирамистином в дозе 2 мл/гол, обеспечивает выраженную стимуляцию противосальмонеллезного и противоэшерихиозного иммунитета. Экономическая эффективность специфической профилактики острых кишечных заболеваний при этом составляет 6,77 руб. на рубль ветеринарных затрат.

Таблица 3 Динамика Т- и В-лимфоцитов в крови телят при вакцинации с иммуномодуляторами

 

 

№ п/п

Группа (п=5)

Общее количество лимфоцитов, г/л

Количество Т-лимфоцитов, %

Количество В-лимфоцитов, %

фон

через 15 дней

через 30 дней

фон

через 15 дней

через 30 дней

фон

через 15 дней

через 30 дней

1.

Вакцина ОКЗ 1,5 мл

3,38± 0,05

4,24±0,09

3,86±0,08

40,00± 1,10

45,00±1,22*'

42,40±1,12

19,80± 1,86

26,40±0,93*

23,40 ±0,93

2.

Вакцина ОКЗ 1,5 мл + Т-активин 0,8 мл

3,39± 0,09

4,55±0,13**-

4,28±0,13*-

39,60± 1,29

48,00±1,73**«

45,20±1,59*'

19,80± 1,39

30,20±1,83**'

26,80±1,46*-

3.

Вакцина ОКЗ 1,5 мл + мирамистин 0,8 мл

3,37± 0,08

4,62±0,10*-

4,21±0,15*

40,00± 1,28

51,20±1,20**"

46,20±1,46*'

20,20± 2,00

29,60±1,56**'

25,40±1,96*

4.

Вакцина ОКЗ 1,5 мл + мирамистин 2,0 мл

3,38± 0,08

5,18±0,20**-

4,89±0,22**-

40,20± 1,36

62,00±2,88**"

54,40±1,89**'

20,20± 1,07

34,20±1,53**"

28,20± 1,66**"

5.

Вакцина ОКЗ 1,5 мл + мирамистин 3,0 мл

3,38± 0,07

5,43±0,09***-

5,03±0,11**"

39,90 ± 1,05

69,40±3,20***"

59,00±2,78**-

20,00 ± 1,32

38,40±1,45**'

31,60± 2,10**-

6.

Интантная

3,37± 0,05

3,90±0,04

3,47±0,05

39,80 ± 1,28

40,40±0,40

39,20±1,92

20,00± 1,14

23,80±1,16

21,40±1,21

Примечание: достоверность различий *, **, *** - к фону; *, **, *** - к интантной группе Р<0,05; 0,01; 0,001 соответственно.

 

Журнал "Ветеринарная медицина" №3-2009

 

 

 

Реклама на сайте