ПОВЫШЕНИЕ ИММУНОГЕННОЙ АКТИВНОСТИ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ОСТРЫХ КИШЕЧНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ У ТЕЛЯТ
Г.Н. КУЗЬМИН, A.M. СКОГОРЕВА, O.B. ПОПОВА, К.В. ПРИБЫТКОВА
ФГОУ ВПО «Воронежский государственный аграрный университет имени К. Д. Глинки»
В общей патологии молодняка крупного рогатого скота большой удельный вес занимают острые кишечные заболевания. Отход телят в первые месяцы жизни в зависимости от уровня ведения животноводства достигает в среднем 10-50% и более (Девришов ДА, 2000). Для предупреждения острых кишечных заболеваний крупного рогатого скота в нашей стране используют живые и инактивированные вакцины, но вакцинация не обеспечивает необходимого уровня иммунитета (Апатенко A.M. и соавт., 1990; Артемов Б.Т. и соавт., 1998), что может быть связано с общей иммунной недостаточностью у животных в условиях воздействия на организм различных неблагоприятных факторов (Жаков М.С. и соавт., 1993; Прудников СИ., 1996; Артемов Б.Т., 1998).
Решить проблему недостаточной эффективности проводимой вакцинации можно путем использования иммуномодулирующих препаратов, способных повышать естественную резистентность животных, напряженность и длительность поствакцинального иммунитета (Басова Н.Ю., 2002; Яковлев Ю.Ю., 2004). В этом отношении перспективными являются катионные поверхностно-активные вещества, в частности широко используемый в различных областях медицины препарат мирамистин, сочетающий выраженные антибактериальные, вирулицидные и иммуномодулирующие свойства (Кривошеий Ю.С., 1985; Шатров В.А., 1992).
Цель нашей работы - повышение эффективности иммунизации против инфекционных кишечных болезней телят путем использования в качестве иммуномодулятора мирамистина. Исследования проводились на кафедре эпизоотологии и вирусологии ФГОУ ВПО «Воронежский ГАУ им. К.Д. Глинки», опытной станции ВГАУ, ЗАО «Родина» Россошанского района и ООО «Ольшанка» Семилукского района Воронежской области.
Для изучения мы взяли широко распространенную вакцину ОКЗ (против острых кишечных заболеваний), которая представляет собой ассоциированную инактивированную вакцину против колибактериоза, сальмонеллеза, клебсиеллеза и протейной инфекции молодняка сельскохозяйственных животных и пушных зверей. Эта вакцина не обеспечивает достаточно напряженного иммунитета. Согласно наставлению рекомендуется с целью стимуляции антителообразования непосредственно перед иммунизацией в вакцину добавлять иммуномодулятор Т-активин. На практике выполнить данную рекомендацию представляется затруднительным, так как во флаконе с вакциной недостаточно объема для добавления иммуномодулятора, а дозировать его на каждое животное излишне трудоемко. Кроме того, высокая стоимость Т-активина является препятствием для его широкого использования в промышленном животноводстве. Поэтому мы начали экспериментальное изучение возможности включения мирамистина в композицию вакцины ОКЗ.
Иммуноадъювантный механизм действия мирамистина основан на повышении проницаемости цитоплазматических мембран лимфоидных клеток и усилении их метаболизма, а также интенсификации функциональной активности фагоцитов, в результате чего последние более эффективно осуществляют фагоцитоз и презентацию антигена иммунокомпетентным клеткам (Шатров В.А., 1992; Криворутченко Ю.С. и соавт., 2000; Завалий М.А. и соавт., 2000). С другой стороны, мирамистин, являясь по своей химической структуре детергентом, оказывает солюбилизирующий эффект на клеточные мембраны бактериальных структур в составе вакцины, тем самым делая антигенные комплексы более доступными для антигенпредставляющих клеток организма, что положительно сказывается на скорости и силе иммунного ответа.
В лабораторных условиях было изучено влияние мирамистина на эффективность вакцинации у белых мышей. В опыте использовали 100 белых беспородных мышей, разделенных на четыре группы (п=25). Животных первой группы иммунизировали внутрибрюшинно вакциной ОКЗ в дозе 0,5 мл (Девришов ДА, 2000) в смеси с 1,0 мл физиологического раствора. Мышам второй группы внутрибрюшинно ввели вакцину ОКЗ в той же дозе, смешанную с 1,0 мл 0,01%-ного раствора Т-активина, третьей - с 1,0 мл 0,01%-ного мирамистина. Согласно исследованиям Шатрова В.А. (1992), максимально выраженная стимуляция гуморального иммунного ответа наблюдается при введении мирамистина в дозе 100 мкг на мышь, что соответствует 1,0 мл 0,01%-ного раствора мирамистина. Животным четвертой группы (контрольной) инъецировали 1,5 мл физиологического раствора.
Через 15 и 30 дней после иммунизации в сыворотке крови мышей определяли титр противосальмонеллезных и противоэшерихиозных антител в реакции агглютинации по общепринятой методике. Было установлено, что у мышей, которым вводили вакцину ОКЗ в сочетании с мирамистином, титр антител к сальмонеллезному антигену на 15-й день после вакцинации был в 1,7 раза, а на 30-й день в 1,6 раза выше, чем у животных, иммунизированных одной вакциной. Титр противоэшерихиозных антител также был выше у мышей, привитых вакциной ОКЗ с мирамистином - в 1,6 раза на 15-й день и в 1,4 раза на 30-й день по сравнению с животными, которым вводилась одна вакцина. Таким образом, введение мирамистина при вакцинации животных инактивированной вакциной оказывает стимулирующее воздействие на формирование защитных антител.
Подбор оптимальной дозы мирамистина при вакцинации телят осуществлялся введением 0,8; 2 и 3 мл/ гол. (в наставлении к вакцине ОКЗ рекомендуется добавлять в вакцину Т-активин из расчета 0,02 см3/кг массы животного, то есть 0,8 мл/гол.). Полученные данные представлены в табл. 1.
Из табл. 1 видно, что уровень специфических антител у телят, привитых с мирамистином и Т-активином в дозе 0,8 мл/гол., достоверно высокий и существенно не различается. Более высокие дозы мирамистина (2 и 3 мл/гол.) способствуют достоверному увеличению титров специфических противосальмонеллезных антител к 15-му дню по сравнению с Т-активином на 31,0 и 36,2%, а к 30-му дню - на 27,9 и 34,4% соответственно, что является доказательством выраженных иммуноадъювантных свойств препарата. Такая же картина наблюдается и в отношении противоэшерихиозных агглютининов - титры достоверно выше к 15-му дню на 71,9 и 84,4%, а к 30-му дню - на 46,2 и 61,5% соответственно для доз 2 и 3 мл/гол.
Помимо этого, для оценки гуморального иммунитета определили содержание иммуноглобулинов классов G, М и А в крови телят опытных и контрольной групп (табл. 2).
Уровень IgG достиг максимального значения во всех опытных группах к 15-му дню после вакцинации.
Динамика специфических титров антител в сыворотке крови телят при вакцинации с иммуномодуляторами
Таблица 1
№ п/п |
Группа (п=25) |
Антигены |
Уровень специфических антител (log2) |
||
фон |
через 15 дней |
через 30 дней |
|||
1. |
Вакцина ОКЗ 1,5 мл |
Сальмонелл езный |
2,0±0,4 |
3,7±
0,5***— |
3,9±
0,7***— |
Эшерихиозный |
1,4±0,2 |
2,9±
0,8***— |
3,1± 0,8***'" |
||
2. |
Вакцина ОКЗ 1,5 мл + Т-активин 0,8 мл |
Сальмонелл езный |
1,9±0,4 |
5,8±
1,2***— |
6,1± 0,9***— |
Эшерихиозный |
1,5±0,4 |
3,2±
1,1***— |
3,б±
1,2***— |
||
3. |
Вакцина
ОКЗ 1,5 мл + мирамистин 0,8 мл |
Сальмонелл езный |
1,9±0,24 |
5,9±
1,1***— |
6,3±
1,5***— |
Эшерихиозный |
1,4±0,22 |
3,6±
1,6***— |
3,9± 1,5***— |
||
4. |
Вакцина ОКЗ 2,0 мл + мирамистин 2,0 мл |
Сальмонелл езный |
2,1 ±0,3 |
7,6±
2,3***— |
7,8±
1,3***— |
Эшерихиозный |
1,5±0,15 |
5,5±
1,9***— |
5,7± 1,9***— |
||
5. |
Вакцина
ОКЗ 1,5 мл + мирамистин 3,0 мл |
Сальмонеллезный |
1,9±0,2 |
7,9±
2,5***— |
8,2±
2,0***— |
Эшерихиозный |
1,4±0,15 |
5,9±
2,1***— |
6,3± 1,8***— |
||
6. |
Интактная |
Сальмонеллезный |
2,0±0,2 |
1,9±0,4 |
2,0±0,4 |
Эшерихиозный |
1,4±0,30 |
1,4±0,1 |
1,6±0,25 |
Примечание: достоверность различий *, **, *** - к фону; *, **, *** - к интактной группе Р<0,05; 0,01; 0,001 со-ответственно.
Таблица 2 Динамика иммуноглобулинов в сыворотке крови телят при вакцинации с иммуномодуляторами
№ п/п |
Группа (п=5) |
Ig G, мг/л |
Ig А, мг/л |
Ig M, мг/л |
||||||
фон |
через 15 дней |
через 30 дней |
фон |
через 15 дней |
через 30 дней |
фон |
через 15 дней |
через 30 дней |
||
1. |
Вакцина ОКЗ 1,5 мл |
10,49± 0,05 |
11,66± 0,10 |
11,60± 0,09 |
1,80± 0,02 |
2,02± 0,02 |
1,97± 0,06 |
1,47± 0,04 |
1,58± 0,08 |
1,55± 0,07 |
2. |
Вакцина ОКЗ 1,5 мл + Т-активин 0,8 мл |
10,51± 0,04 |
13,88± 0,12** |
13,27± 0,11** |
1,78± 0,06 |
2,15± 0,10*' |
2,11± 0,08*' |
1,46± 0,11 |
1,67± 0,06 |
1,62± 0,10 |
3. |
Вакцина ОКЗ 1,5 мл + мирамистин 0,8 мл |
10,51± 0,06 |
13,91± 0,10** |
13,52± 0,15** |
1,77± 0,08 |
2,17± 0,09** |
2,23± 0,05*' |
1,45± 0,07 |
1,72± 0,03*' |
1,68± 0,09 |
4. |
Вакцина ОКЗ 1,5 мл + мирамистин 2,0 мл |
10,47± 0,04 |
14,88± 0,14*' |
14,08± 0,11*- |
1,79± 0,05 |
2,25± 0,08*' |
2,37± 0,07*' |
1,44± 0,05 |
1,89± 0,09*' |
1,81± 0,10* |
5. |
Вакцина ОКЗ 1,5 мл + мирамистин 3,0 мл |
10,47± 0,07 |
15,57± 0,13*** |
14,40± 0,09*' |
1,79± 0,05 |
2,30± 0,12*' |
2,39± 0,08*' |
1,45± 0,06 |
2,10± 0,11*" |
1,92± 0,05*' |
6. |
Интактная |
10,50± 0,03 |
11,11± 0,02 |
11,52± 0,04 |
1,78± 0,04 |
1,82± 0,10 |
1,90± 0,01 |
1,45± 0,06 |
1,44± 0,03 |
1,51± 0,07 |
Примечание: достоверность различий *, **, *** - к фону; *, **, *** - к интактной группе Р<0,05; 0,01; 0,001 соответственно.
Наиболее высокое его содержание наблюдается в группах, где вакцина вводилась в сочетании с мирамистином. При этом наивысшие результаты достигнуты при введении препарата в дозах 2 и 3 мл/гол. К 30-му дню содержание IgG несколько снизилось по сравнению со значениями показателя на 15-й день, оставаясь при этом достоверно высоким по сравнению с фоном. Уровень IgA в первой и второй группах максимально высокий на 15-й день после иммунизации, к 30-му дню он незначительно снижается. В третьей, четвертой и пятой группах содержание IgA продолжает достоверно расти и после 15-го дня. Таким образом, на 30-й день значение IgA в первой группе практически не отличается от контроля, в остальных группах оно было достоверно выше. Тенденция к росту показателя наиболее выражена в группах, где животных вакцинировали с мирамистином, при этом различия в двух последних группах были незначительны.
Уровень IgM наиболее высокий на 15-й день, после чего он также незначительно снижается во всех опытных группах. На 30-й день содержание IgM достоверно высокое по отношению к фоновым значениям в четвертой и пятой группах.
Таким образом, анализируя динамику иммуноглобулинов основных классов (А, М и G), можно констатировать их достоверное повышение после вакцинации с иммуномодуляторами (за исключением IgM после вакцинации с Т-активином и мирамистином в дозе 0,8 мл/ гол.). Использование мирамистина в дозах 2 и 3 мл/гол, показало наилучшие результаты, поскольку позволило поддерживать факторы гуморального иммунитета на высоком уровне в течение всего опыта, причем показатели в этих двух группах различались несущественно.
Для оценки клеточного звена иммунитета в периферической крови животных опытных и контрольной групп определили количество иммунокомпетентных клеток в абсолютном содержании, а также соотношение Т- и В-лимфоцитов. В результате исследований установили высокую активность иммунокомпетентных клеток при иммунизации с иммуномодуляторами (табл. 3).
У телят, вакцинированных с иммуномодуляторами, было отмечено достоверное повышение количества лимфоцитов по сравнению с контрольными и фоновыми значениями. Наибольшие значения были достигнуты в четвертой и пятой группах на 15-й и 30-й день после иммунизации. Количество лимфоцитов в группе, где применялась только вакцина, также выросло, но разница была недостоверной по отношению к показателям интактной группы. Количество Т-лимфоцитов было максимально высоким на 15-й день после вакцинации (достоверно для всех опытных групп), затем оно несколько снизилось к 30-му дню. В группах, где телят вакцинировали с Т-активином и мирамистином в дозах 0,8 мл/гол., значения различались незначительно. В четвертой и пятой группах, где доза мирамистина составляла 2 и 3 мл/гол., содержание Т-клеток на 15-й день опыта достигло 62,00 и 69,40%, на 30-й - 54,40 и 59,00% соответственно.
В отношении В-лимфоцитов прослеживалась подобная тенденция. Их содержание на 15-й день после иммунизации достоверно выросло во всех группах, за исключением первой. На 30-й день количество В-клеток снизилось во всех опытных группах, оставаясь достоверно высоким по отношению к интактной группе во второй, четвертой и пятой группах.
Таким образом, установлено, что наиболее высокая активность лимфоцитов наблюдалась при иммунизации телят с мирамистином в дозах 2 и 3 мл/гол., при этом результаты, полученные при введении двух этих доз, различаются незначительно, что позволяет рекомендовать дозу 2 мл/гол.
Из полученных данных следует, что иммунизация телят вакциной ОКЗ в сочетании с мирамистином в дозе 2 мл/гол, обеспечивает выраженную стимуляцию противосальмонеллезного и противоэшерихиозного иммунитета. Экономическая эффективность специфической профилактики острых кишечных заболеваний при этом составляет 6,77 руб. на рубль ветеринарных затрат.
Таблица 3 Динамика Т- и В-лимфоцитов в крови телят при вакцинации с иммуномодуляторами
№ п/п |
Группа (п=5) |
Общее количество лимфоцитов,
г/л |
Количество Т-лимфоцитов, % |
Количество В-лимфоцитов, % |
||||||
фон |
через 15 дней |
через 30 дней |
фон |
через 15 дней |
через 30 дней |
фон |
через 15 дней |
через 30 дней |
||
1. |
Вакцина ОКЗ 1,5 мл |
3,38± 0,05 |
4,24±0,09 |
3,86±0,08 |
40,00± 1,10 |
45,00±1,22*' |
42,40±1,12 |
19,80± 1,86 |
26,40±0,93* |
23,40 ±0,93 |
2. |
Вакцина ОКЗ 1,5 мл + Т-активин 0,8 мл |
3,39± 0,09 |
4,55±0,13**- |
4,28±0,13*- |
39,60± 1,29 |
48,00±1,73**« |
45,20±1,59*' |
19,80± 1,39 |
30,20±1,83**' |
26,80±1,46*- |
3. |
Вакцина ОКЗ 1,5 мл + мирамистин 0,8 мл |
3,37± 0,08 |
4,62±0,10*- |
4,21±0,15* |
40,00± 1,28 |
51,20±1,20**" |
46,20±1,46*' |
20,20± 2,00 |
29,60±1,56**' |
25,40±1,96* |
4. |
Вакцина ОКЗ 1,5 мл + мирамистин 2,0 мл |
3,38± 0,08 |
5,18±0,20**- |
4,89±0,22**- |
40,20± 1,36 |
62,00±2,88**" |
54,40±1,89**' |
20,20± 1,07 |
34,20±1,53**" |
28,20± 1,66**" |
5. |
Вакцина ОКЗ 1,5 мл + мирамистин 3,0 мл |
3,38± 0,07 |
5,43±0,09***- |
5,03±0,11**" |
39,90 ± 1,05 |
69,40±3,20***" |
59,00±2,78**- |
20,00 ± 1,32 |
38,40±1,45**' |
31,60± 2,10**- |
6. |
Интантная |
3,37± 0,05 |
3,90±0,04 |
3,47±0,05 |
39,80 ± 1,28 |
40,40±0,40 |
39,20±1,92 |
20,00± 1,14 |
23,80±1,16 |
21,40±1,21 |
Примечание: достоверность различий *, **, *** - к фону; *, **, *** - к интантной группе Р<0,05; 0,01; 0,001 соответственно.
Журнал "Ветеринарная медицина" №3-2009