ГОНАДОТРОПНЫЕ ГОРМОНЫ НИВЕЛИРУЮТ ИНГИБИРУЮЩИЙ ЭФФЕКТ АНГИОТЕНЗИНА II НА СОЗРЕВАНИЕ ООЦИТОВ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА IN VITRO
Сметаеива И.Г., Татарпнова Л.В.
Всероссийский научно-исследовательский институт физиологии, биохимии и питания сельскохозяйственных животных РАСХН
Боровск Калужской обл.. 249013, Россия
Кривохарченко А.С.
Max-Dellbruk Center for Molecular Medicine (MDC) D-13092 Berlin-Buch, Germany
Введение. Большинство факторов, действующих на процесс созре-вания ооцитов in vivo неизвестны, поэтому воспроизвести вне орга-низма условия созревания невозможно. Как следствие, эффективность созревания и качество ооцитов, созревших in vitro ниже, чем in vivo. Поэтому очень важно идентифицировать эти факторы, с тем, чтобы можно было добавлять их в культуральную систему in vitro.
Ренин-ангиотензиновая система (RAS) включает ангиотензин II (Angll) и его различные рецепторы. Angll - активный октапептид, главный функциональный тип в RAS. Известно,что RAS играет много ролей в организме млекопитающих, включая регуляцию кровяного давления, метаболизацию солей и воды, поддержание баланса жидко-сти в организме, и стимуляцию пролиферации клеток гладкой муску-латуры. К тому же, имеются убедительные данные, что RAS пред-ставлена в яичниках млекопитающих и играет важную роль в синтезе и секреции простагландинов и эстрогенов, регуляции роста фоллику-лов, овуляции и атрезии.
Значительные межвидовые различия, касающиеся экспрессии и клеточной локализащш Angll рецепторов в овариальных фолликулах, подтверждают различия среди видов в физиологической роли RAS. Ро.ль Angll в созревании ооцитов крупного рогатого скота (КРС) изу-чена недостаточно по сравнению с другими видами.
Цель работы - оценить влияние различных концентраций Angll на ядерное и цитоплазматическое созревание ооцитов КРС in vitro в без-белковой среде MEM-альфа с гормонами либо без них.
Материал и методика исследований. Получение ооцитов, их со-зревание, оплодотворение и культивирование осуществляли так, как нами было описано ранее [2, 1, 3] с некоторыми модификациями. В первой серии экспериментов в среду созревания МЕМ-апьфа с гормо-нами (1мкг/мл гипофизарного свиного фолликулостимулирующего гормона, "ФСГ-супер", ООО "Агробиомед ",ВНИИФБиП с/х животных, и 0.3 ед/мл хорионического гонадотропина человека, хГч. "Мос-ковский эндокринный завод") добавляли Angll ("Sigma",США) в концентрациях 10-11, 10-9, 10-7М; во второй серии экспериментов в среду MEM-альфа без гормонов добавляли Angll в концентрации 10-7М.
Результаты исследований и их обсуждение. Полученные нами ре-зультаты показывают, что Angll в концентрациях 10-11, 10-9, 10-7Мне оказывает влияния на ядерное созревание ооиитов КРС in vitro в том случае, если в среду созревания добавлены гормоны (57,1 % в контро-ле vs 64,6 % в опыте; 60,8 % vs 58,6 %; 65,2 % vs 66,7 %, соответствен-но).
Однако, если в среду созревания гормоны не добавлялись. Angll в концентрации 10-7М достоверно ингибпровал выделение первого по-лярного тельца (43,6 % в контроле vs 29,3 % в опыте, Р<0,05). Это поз-воляет сделать предварительный вывод, что гонадотропные гормоны нивелируют пнгибирующий эффект Angll на ядерное созревание оо-цитов in vitro.
В отдельной серии экспериментов нами не было выявлено влияния Angll, добавленного в концентрации 10-7М в среду MEM-альфа с гор-монами на цигоплазматическое созревание ооцитов КРС, критерием которого являлось развитие эмбрионов до премплантацпонных стадий - не было разницы между контрольной и опытной группой ни по проценту первоначального дробления (61,1 % vs/ 61.5 %), ни по про-центу эмбрионов, достигших стадии морулы/бластоцисты (20 % vs 16,7 %).
Наши данные не согласуются с результатами Giometti et al. [6], ко-торые показывают, что Angll в трех аналогичных концентрациях, в среде 199HEPES без гормонов не оказывал влияния на созревание оо-цитов КРС in vitro. По данным этих авторов Angll не действует напря-мую на ооциты КРС, а только через фолликулярные клетки (клетки теки), пракпгчески полностью аннулируя ингибирующий эффект по-следних на созревание ядра. Этот факт объясняется авторами тем, что Angll-рецепторы (ATI и АТ2) были найдены именно в клетках теки КРС, но не в гранулезных клетках [5, 4] . В то же время у свиней один подтип AngII-рецепторов (ATI) был найден как в зоне пеллюцида, так и в гранулезных клетках [7] и Angll в концентрации 10-7М в среде с гормонами стимулировал ядерное и цитоплазмат1гческое созревание ооцитов этого вида животных.
Заключение. Таюгм образом, складывающаяся на данный момент картина, представляется достаточно противоречивой. Механизм дей-ствия Angll на созревание ооцитов КРС до конца неясен. Вопрос о перспективах использования Angll в качестве составляющего компо-нента культуральных сред остается открытым, требуются дальнейшие расширенные исследования.
ЛИТЕРАТУРА
1. Кривохарченко А.С., Сметанина И.Г.. Татаринова Л.В. Оплодотворение и последующее развитие ооцитов крупного рогатого скота после сокращенной инкубации со сперматозоидами//Онтогенез. 2001. Т. 32. № 4. С. 283-287.
2. Сметанина И.Г.. Татаринова Л.В., Кривохарченко А.С. Влияьше состава культуральных сред на созревание ооцитов и развитие эмбрионов крупного рогатого скота in vitro // Онтогенез. 2000. Т.31. № 2. С. 139-143.
3. Сметанина И.Г.. Татаринова Л.В.. Кривохарченко А.С. Оплодотворение ооцитов крупного рогатого скота Lu vitro в безбелковой культуральной системе/Юнтогенез. 200б.Т.37.№6.С.438-443.
4. Acosta T.J.. Bersha В., Ozawa Т. et al. Evidence for a local endotheiiii-angiotensinatrial natriuretic peptide system in bovine mature follicles in vitro: effects on steroid hormones and prostaglandrn secretion// Biol. Reprod. 1999. V.61.P.1419-25.
5. Brunswig- Spickenheier B.; Mukhopadhyay A.K. Characterization of angiotensin П receptor subtype on bovine thecal cells and its regulation by luteinizing horrnone// Endocrinology. 1992.V.131.P.1445-52.
6. Giometti J.C. Bertagnolli A.C., Ornes R.C. et al. Angioteusin П reverses the inhibitory action produced by theca cells on bovine oocyte nuclear maturation// Theriogenology. 2005. V.63.P. 1014-25.
7. Li Y.H., Jiao L.H.. Liu R.H. et al. Localization of angiotensin П in pig ovary and its effects on oocyte maturation in vitro// Theriogenology.2004. V.61. P. 447-59. 1. компьютере. Для профессионалов / В. Боровиков. - СПб. : Питер. 2001. - 656 с.
Материалы международной научно-практической конференции, посвященной 75-летию со дня рождения
и 50-летию научно-практической деятельности доктора ветеринарных наук, профессора Г. Ф. Медведева.
Горки БГСХА
№ кошелька: 410011987169836