ОЦЕНКА КАЧЕСТВА И БЕЗОПАСНОСТИ ПРОДУКТОВ УБОЯ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА ПРИ ЛЕЙКОЗЕ
З.Н. МЕНЬШИКОВА, О.Н. РУДАКОВА
ФГОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К. И. Скрябина»
Основными методами прижизненной диагностики лейкоза крупного рогатого скота (КРС) являются реакция им-мунодиффузии в агарном геле (РИД) и иммуноферментный анализ, позволяющие выявлять антитела к ВЛ КРС в сыворотке крови животных (Miller J. Van der Maaten, M., 1976; Шишков В. П., Бурба Л.Б., 1988; Иванова Л.А., 1999; Вер-ховский О. А. и соавторы, 2002).
Массовые исследования крови в РИД показывают, что число неблагополучных пунктов по лейкозу КРС в нашей стране не уменьшается. Поэтому на мясоперерабатывающих предприятиях по-прежнему подвергают убою большое количество инфицированных ВЛ КРС животных (Аль-бикова Г. М., 2001; Гулюкин М. И. и соавторы, 2004; Соколов Д. С, 2004). В отличие от стран Евросоюза в России, продукты убоя инфицированных ВЛ РКС и гематологичеки по-ложительных на лейкоз животных при отсутствии патологоа-натомических изменений реализуются без ограничений.
В странах Евросоюза ветеринарный контроль за качеством и безопасностью продуктов животноводства, соответствующий нормативным документам, осуществляется в процессе их производства (на ферме, в хозяйстве) с прижизненным исследованием крови, молока, а также тканей животных от выборочного убоя (Смирнов A.M., 2006).
Цель проведенной работы состояла в изучении комплекса показателей ветеринарно-санитарной оценки продуктов убоя крупного рогатого скота на разных стадиях лейкозо-генеза.
Объектом исследования были 125 коров черно-пестрой и айширской пород из неблагополучных по лейкозу хозяйств Московской и Брянской областей.
Лейкоз КРС диагносцировали с помощью РИД, полиме-разной цепной реакции (ПЦР) и электронной микроскопии, а после убоя животных - посредством патологоанатоми-ческого и гистологического исследований. Ветеринарно-санитарную оценку продуктов убоя от 75 гол. КРС, находившихся на разных стадиях лейкозогенеза (бессимптомная, гематологическая, опухолевая) осуществляли органолепти-ческими и лабораторными методами в соответствии с «Правилами ветеринарного осмотра убойных животных ветеринарно-санитарной экспертизы масса и мясопродуктов» (М., 1988), ГОСТ 7269-79 «Мясо. Методы отбора и органолеп-тические методы определения свежести» и ГОСТ 21237-75 «Мясо. Методы бактериологического анализа» и др.
Электронную микроскопию нативных и культивированных in vitro лимфоцитов крови КРС проводили по общепринятым методикам в нашей модификации (Грязнева Т.Н. и соавт., 2003). Ультратонкие срезы изучали и фотографировали под электронным микроскопом JEM - 100C при 80 кв.
При исследовании в ПЦР крови и продуктов убоя животных пользовались набором стандартных праймеров к ВЛ КРС (Джапаралиев Н.Т. и соавт., 2004).
Рис. I. Увеличение нижнечелюстного лимфатического узла
Из 125 обследованных коров 104 находились на бессимптомной стадии инфекции вируса лейкоза крупного рогатого скота (ВЛ КРС) (наличие специфических антител при нормальной гемограмме 4,5-10,0 тыс. лейкоцитов в 1 мкл, 50-60% лимфоцитов), 21 - на гематологической и опухолевой стадиях болезни (наличие лейкоцитоза и лимфоцитоза - 22-90 тыс. лейкоцитов, 80-90% лимфоцитов), в т.ч. 3 - на клинической стадии лейкоза (увеличение лимфатических узлов: нижнечелюстных, поверхностных шейных, поверхностных паховых, заднепроходных (рис. 1, 2). У 1 коровы наблюдали экзофтальм.
Рис. 2. Увеличение лимфатического узла коленной складки
При электронно-микроскопическом исследовании лим-фоидных клеток крови здоровых животных установили, что они в основном представлены малыми и средними лимфоцитами с ровной или извилистой поверхностью. Изредка встречались менее дифференцированные клетки типа больших лимфоцитов и лимфобластов.
У здорового скота из благополучных по лейкозу хозяйств аномалий ядра лимфоцитов (карманов и инвагинатов) не обнаружили. У клинически здоровых животных серопози-тивных к ВЛ КРС животных ядерные карманы находили в среднем в 2,91+ 0,85% лимфоцитах.
На гематологической и опухолевой стадиях в периферической крови выявляли лимфоциты небольших размеров (до 10 мк), которые имели нормальную величину, но существенно отличались от нормальных клеток по ультраструктуре отдельных органелл, Как в малых, так и в больших лимфоцитах и лимфобластах, обнаруживали характерные изменения митохондрий (дискомплексацию и деструкцию крист), гипертрофию эндоплазматического ретикулума и компонентов аппарата Гольджи. Наиболее важными ультраструктурными изменениями их ядер были многочисленные карманы (у 12-27,2% клеток, рис. 3, 4), инвагиниты, фибриллярные комплексы. Последние обнаружили также в мембранах митохондрий.
В нативных лимфоцитах крови на всех стадиях лейкоз-ного процесса мы ни в одном случае не обнаружили вирус лейкоза. Однако в 16,5-48,3% короткоживущих 48-часовых культурах лейкоцитов крови серопозитивных животных выявили лимфоидные вирусопредуцирующие клетки. Вирио-ны ВЛКРС имели типичные для ретровируса типа С размеры и структуру: двухконтурную поверхностную мембрану толщиной 8-9 нм, электронно-прозрачный промежуточный слой толщиной 10-15 нм, электронно-плотный нуклеоид, имевший диаметр 60-90 нм. Размер зрелой вирусной частицы составлял 80-120 нм (рис. 5, 6).
При послеубойном осмотре туш и органов КРС, находившегося на опухолевой стадии лейкоза, новообразования обнаруживали в лимфатических узлах, сердце, селезенке, почках, преджелудках. Туши таких животных имели органо-лептические признаки, характерные для мяса сомнительной свежести или несвежего: удовлетворительное и плохое обезкровливание, увеличение лимфатических узлов и на-личие в них кровоизлияний, а также инфильтратов. Туши и другие продукты убоя животных, находившихся на бессимптомной и гематологических стадиях болезни, и здорового скота одной и той же категории упитанности не имели отличий.
Рис. 3, 4. Электронограммы лейкозных лимфоцитов с ядерными карманами (ЯК) из периферической крови коров, больных ХЛЛ ( х 22000; 34000)
Рис. 5, 6, Электронограммы вирионов ВЛ КРС на поверхности лимфоидных клеток, 48 часов культивирования ( х 28000, 36000)
Химический состав продуктов убоя животных - важ-ный критерий их качества. Установили, что химический состав мышечной ткани зависит от степени тяжести лей-козного процесса. В мясе больных животных возрастало содержание влаги. У здоровых животных этот показатель составил 77,8%, при бессимптомной инфекции, на гематологической и опухолевой стадиях лейкоза он возрастал соответственно на 0,68; 1,85 и 2,02%. Увеличение содержания влаги отметили также в паренхиматозных органах. Различия статистически достоверны (р<0,01).
У здоровых животных содержание белка в мясе составило 21,58%, а на бессимптомной, гематологической и опухолевой стадиях лейкоза снижалось на 0,36% (р<0,05), 0,72% (р<0,01) и 1,91% (р<0,001) соответственно. Одновременно s нем снизилось содержание жира; у клинически здоровых неинфицированных В Л КРС животных его количество составляло 1,54%, на бессимптомной, гематологической и опухолевой стадиях лейкоза оно снизилось на 0,23 (р<0,01), 0,34 (р<0,05) и на 0,62 (р<0,01) соответственно. В концентрации минеральных веществ в мышечной ткани больных лейкозом и здоровых животных достоверных различий не установили.
При бактериологическом исследовании установили, что микробная обсемененность мышечной ткани и паренхиматозных органов КРС зависит от стадии развития лейкоза. Из мышечной ткани и органов животных в бессимптомной стадии лейкоза в 4-х из 21 случаях были выделены микрококки, аэробные бациллы. В мышечной ткани у 9 из 25 больных животных в гематологической стадии лейкоза были выделены бактерии группы кишечной палочки и рода Proteus. В стадии поражения множественных лимфоузлов (опухолевой) из мышечной ткани 5 больных животных выделены бактерии группы кишечной палочки, сальмонеллы, стафилококки, аэробные бациллы. Таким образом, по результатам бактериологических исследований установлено, что наибольшую микробную обсемененность образцов мышечной ткани и внутренних органов наблюдали у животных, отобранных в опухолевой стадии. По частоте обнаружения микроорганизмов в органах и тканях на первом месте стоят лимфоузлы (62,8%), затем печень (52,8%), почки (37,18%) и мышечная ткань (30%).
В пробах охлажденного и хранившегося при -20*С мясе, внутренних органах и эндокринных желез, взятых на разных стадиях лейкоза (бессимптомной, гематологической и опухолевой), в ПЦР установили наличие ДНК ВЛ КРС.
Электронная микроскопия позволяет установить характерные признаки малигнизации лимфоидных клеток у КРС на всех стадиях лейкозного процесса, в т.ч. и на бессимптомной. Неопластические клетки имеют характерные аномалии ядра (карманы), отсутствующие в норме или при других болезнях с лейкемическими проявлениями (Pomeroy et al., 1977; Weber eta!,, 1981; Меньшикова З.Н., 2000, 2003).
Мясо и продукты убоя КРС на всех стадиях лейкозоге-неза имеют отличия по органолептическим, физико-химическим, микробиологическим, морфологическим и гистологическим показателям от продуктов убоя здоровых животных. Мясо и продукты убоя инфицированных В Л КРС и больных лейкозом животных содержат лейкозно-трансфор-мированные лимфоциты и провирус лейкоза, а также чаще контаминированы бактериальной микрофлорой.
ВЛ КРС обнаруживали в ПЦР как в охлажденном, так и в замороженном мясе.
Поэтому мясо и продукты убоя животных, находящихся на всех стадиях лейкозного процесса, необходимо подвергать термической обработке для обезвреживания возбудителя. Нельзя использовать органы и ткани серопозитивных к ВЛ КРС животных в биотехнологических и медицинских целях.
Журнал "Ветеринарная медицина" № 2-3, сентябрь 2007
№ кошелька: 410011987169836