ЭФФЕКТИВНОСТЬ СЕРОЛОГИЧЕСКИХ МЕТОДОВ ИССЛЕДОВАНИЯ
ПРИ ЛЕЙКОЗЕ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
О.В. ИВАНОВ, О.Ю. ИВАНОВА, В.П. ФЕДОТОВ,
Т.И. БРЕЗГИНОВА, Н.Г. МОНОВА
Ивановская ГСХА
М.В. БАЛАНДИНА, О.А. ВЕРХОВСКИЙ
НИИ диагностики и профилактики болезней
человека и животных
Лейкоз крупного рогатого скота относится к числу наиболее распространенных хронических инфекционных болезней сельскохозяйственных животных во многих странах мира, включая Россию. Его этиологическим агентом является онкогенный РНК-содержащий вирус семейства Retroviridae, рода Deltaretroviruses (ВЛКРС). За последние 15 лет в Российской Федерации уровень инфицированное™ ВЛКРС практически не изменился и находится в пределах 10,3 - 14,7 %, а доля лейкоза в структуре инфекционной патологии крупного рогатого скота составляет более 50 % (М.И. Гулюкин и соавт., 2004; В.А. Апалькин и соавт., 2005; С.А. Дудников и соавт., 2006). При этом одним из сдерживающих факторов эффективности оздоровительных мероприятий остается несвоевременная диагностика лейкоза, связанная с использованием разноплановых методов исследования (гематологических, клинических, патоморфологических, серологических, молекулярно-биологических), обладающих разной чувствительностью, специфичностью и практической значимостью.
В настоящее время согласно стандартам МЭБ (OIE. World Animal Health in 2005) узаконенными методами диагностики лейкоза крупного рогатого скота являются реакция иммуно-диффузии в геле агара (РИД) и метод иммуно-ферментного анализа (ИФА). Ранее считали, что применение ИФА ограничено коротким промежутком времени, поскольку уровень специфических антител растет очень быстро, и в связи с этим все методы диагностики равны по эффективности (Л.Г. Бурба и соавт., 1988). Отчасти это действительно так, если иметь дело с классическим течением инфекционного процесса, однако существует немало факторов, влияющих на их чувствительность. К ним относятся инкубационный период болезни, продолжительность которого может быть до 2 мес, и вторичные иммунодефициты, обусловленные пред- и послеродовым периодом у коров, некоторыми инфекционными и инвазионными болезнями, применением живых вакцин, а также экологически неблагоприятными факторами окружающей среды. Поэтому, несмотря на то что РИД остаётся одним из основных диагностических методов, именно ИФА широко используют в Национальных программах по борьбе с лейкозом крупного рогатого скота во многих странах Западной Европы и Америки, многие из которых уже успешно завершены. Практическая диагностическая эффективность ИФА достаточно широко освещена в литературе (Л.Г. Бурба и соавт., 1988; О.А. Верховский и соавт., 2002; М.И. Гулюкин и соавт., 2004; В.А. Апалькин и соавт., 2005; С.А. Дудников и соавт., 2006; V.K. Nguyen et al., 1993; J.M. Sargeant et al., 1997; K.T. Carli et al., 1999; С Simard etal., 2000; S.E. Gutierrez et al.. 2001; K.G. Trono et al., 2001). В отличие от качественной РИД ИФА позволяет определять относительное содержание антител в сыворотке крови или молоке, что открывает новые возможности в проведении более углубленных исследований, направленных на изучение иммунопатогенеза лейкоза.
Большинство экспериментов, посвященных оценке ИФА и РИД, проведено на взрослых животных без анализа количественных показателей содержания вирусспецифических антител, поэтому цель нашей работы - определить закономерности распределения уровня антител к ВЛКРС в ИФА по сравнению с результатами РИД.
Материалы и методы. В опытах использовали сыворотку крови телят (п=169), полученную в динамике в первые шесть месяцев жизни. Молодняк был рожден от серопозитивных коров (РИД+) в неблагополучных по лейкозу хозяйствах Ивановской (п=5) и Владимирской (п=2) областей с разным уровнем инфицированности стад ВЛКРС.
Уровень вирусспецифических антител определяли иммуноферментным методом, используя ИФА-набор вариант VeriTest (НПО НАРВАК) и выражали в международных единицах (EU). Пробу считали положительной при EU >: 10. Параллельно сыворотку крови подопытных животных исследовали в РИД, применяя соответствующий набор Курской биофабрики. Постановку реакций, учет и интерпретацию результатов проводили согласно инструкции производителей. Данные обрабатывали статистически общепринятыми методами.
Возраст телят, мес
Диагностическая эффективность ИФА и РИД в соотношении с количественными показателями содержания антител к ВЛКРС в сыворотке крови телят: 1, 3 - количество животных, положительно реагирующих в ИФА и РИД соответственно; 2 - уровень вирус-специфических антител, установленный в ИФА. Приведены среднегеометрические значения величин.
Результаты исследований. Исследуя сыворотку крови молодняка на наличие антител к ВЛКРС, установили, что из 33 телят месячного возраста в ИФА и в РИД положительно реагировали соответственно 15 (45,5 %) и 13 (39,4 %) животных; из 43 особей 2-месячного возраста -24 (56 %) и 13 (30 %); из 16 в возрасте 3 мес - 9 (56,2 %) и 4 (25 %); из 15 в возрасте 4 мес - 8 (53,3 %) и 5 (33,3 %); из 14 в возрасте 5 мес - 6 (43 %) и 5 (36 %) и из 10 телят 6-месячного возраста- 8 (80%) и 5 (50%) особей (см. рисунок). При этом уровень вирусспецифических антител, выявляемых в ИФА, у молодняка различных возрастных групп распределялся по-разному. При исследовании телят в месячном возрасте он был довольно ровным у всех особей и в 94 % случаев находился в диапазоне 58,7- 107,3 EU. Среди 2-месячных телят у 21 % особей (п=5) содержание антител было ниже 21,3 EU; у 25 % (п=6) - в пределах 38,4 - 66,1 Е11иу54%(п=13)-72,8- 113,9 EU. КЗ-месячному возрасту у 56 % молодняка (п=5) уровень антител к ВЛКРС колебался в пределах 13,5 -24,7 EU и у44% он превышал 58,4 EU. Среди 4-месячных животных разница между индивидуальными показателями содержания антител заметно снижалась, так у 63 % телят концентрация антител составляла 45,1 - 89,1 EU и у 37 % - 21,3 - 29,9 EU. Среди 5-месячных 67 % телят имели достаточно высокий уровень антител (76,1 - 98,1 EU) и только 33 % - низкий (16,2 -23,9 EU). В группе 6-месячных особей эта тенденция сохранялась, 87 % животных имели максимально высокий уровень антител (94,5 -109,2 EU) и 25 % - в пределах 13,2 - 24,8 EU.
Сравнивая данные РИД и ИФА, установили, что чем больше в группе животных с высоким уровнем антител в ИФА, тем выше численность положительно реагирующих в РИД. Так, все 13 телят 2-месячного возраста с высоким уровнем антител в ИФА (72,8 - 113,9 EU) были положительны в РИД. У РИД-положительного 3-месячного молодняка уровень антител в ИФА составлял 58,4 - 103,5 EU. Аналогичную ситуацию наблюдали и в других возрастных группах.
Из данных таблицы видно, что при исследовании крови телят результаты ИФА и РИД совпали в 85 % случаев, что несколько ниже, чем обычно бывает при обследовании взрослого поголовья (О.А. Верховский и соавт, 2002). При этом 22 пробы (13 %), положительные в ИФА, дали отрицательные результаты в РИД, а 2 пробы (1,1 %), положительные в РИД, были отрицательными в ИФА.
Сопоставляя количество положительных реакций в РИД с уровнем антител в ИФА установили, что 89 % РИД+ реакций (64 из 71) приходились на пробы, в которых уровень антител превышал 41 EU, а в 72 % случаев он был выше 90 EU (среднее значение показателя 95,2 EU).
При анализе проб с более низким содержанием антител к ВЛКРС ( 10-60EU) РИД оказалась менее эффективной по сравнению с ИФА, что согласуется с данными цитированных выше исследователей, свидетельствующими о том, что РИД обладает более низкой чувствительностью.
В дальнейшем с помощью ИФА мы изучали возрастную динамику содержания колостральных и постинфекционных антител у телят, рожденных от матерей, инфицированных ВЛКРС,
Соотношение результатов ИФА и РИД по выявлению антител к ВЛКРС
|
Результат реакции |
Количество реагирующих животных |
|||||||||||
|
РИД |
ИФА |
Всего |
|
|
С
определенным |
уровнем
антител в ИФА, EU |
|
|
||||
|
< 10 |
Ю-30 |
31 -40 |
41 -50 |
51 - 60 |
61
-70 |
71 -80 |
81 -90 |
91
- 100 |
>101 |
|||
|
+ + |
47 |
0 |
0 |
0 |
1 |
0 2 |
5 5 |
11 |
23 |
|||
|
- |
96 |
96 |
0 |
0 |
0 |
0 0 |
0 0 |
0 |
0 |
|||
|
+ |
24 |
0 |
4 |
4 |
4 |
5 1 |
2 2 |
1 |
1 |
|||
|
+ |
2 |
2 |
0 |
0 |
0 |
0 0 |
0 0 |
0 |
0 |
|||
|
Итого |
169
98 4 4 5 5 3 7 7 Примечание. + , - -
положительный и отрицательный результат реакции соответственно. |
12 |
24 |
|||||||||
|
|
||||||||||||
что ранее не удавалось выполнить с помощью РИД (неопубликованные данные).
Заключение. Статистический анализ полученных результатов свидетельствует о том, что существует достаточно высокая корреляционная связь между показателями, характеризующими количественное содержание антител к ВЛКРС в ИФА и диагностической чувствительностью РИД (r=0,76, P < 0,05). Поэтому при оздоровлении неблагополучных хозяйств от лейкоза РИД можно использовать только на первом этапе мероприятий. В дальнейшем животное, отрицательно реагирующее в РИД, необходимо исследовать в ИФА и только после получения отрицательного результата его можно считать серонегативным. Подобную схему оздоровительных мероприятий в настоящее время используют в неблагополучных хозяйствах Ивановской области.
журнал "Ветеринария" №7 2008
№ кошелька: 410011987169836